病毒是无细胞结构的小,简单的微生物。但病毒的感染很普遍,在微生物引起的感染性疾病中大多数由病毒引起。病毒感染在感染性疾病中占有重要地位,尽快获得病毒的实验诊断,对控制病毒的传播,疾病的诊断和防治有较其重要意义,而且通过实验诊断还可以发现新病毒。目前的病毒检测技术主要有传统的病毒分离培养,中和实验,凝集试验,电镜技术等;*学的*荧光检测,酶*法,*层析法,放射*法等;分子生物学的聚合酶链反应,基于核酸序列的扩增技术,环介导等温扩增技术,Xtag RVP技术,生物芯片技术等。
病毒增殖的观察:
病毒在细胞内增殖的指标:
1、细胞形态的改变;
2、红细胞吸附;
3、细胞培养液pH值改变;
病毒数量趿病毒感染性测定:
1、血凝试验;
2、中和试验;
3、空斑形成试验;
4、半数感染量(ID50)和组织培养半数感染量( TCID50 )。
病毒检测形态学检查及诊断:
1、光学显微镜:直接观察到较大的病毒体(如痘病毒)、包涵体狂犬病毒感染一一嗜酸性包涵体。
2、扫描电子显微镜:用于观察病毒和表面结构和附属结构等。
3、透射电子显微镜:用于观察病毒的大小、形态与结构及细胞内的**微结构等。
病毒的分离与培养:主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种法等,而对细胞、鸡胚不敏感,又没有合适动物模型的病毒,可采用基因克隆的方法。
1、细胞培养法:二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织,主要用于培养病毒制备疫苗等;原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞,原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和后立即进行培养;传代细胞来源于细胞或细胞株传代过程中变异的细胞。
2、鸡胚培养:鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法,此方法可用以进行多种病毒的分离、培养,勒的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
3、动物接种:常用的实验动物有、乳鼠、、家兔猴和鸡等;常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式。
病毒核酸分子检测:
1、基因芯片:基因芯片(gene chip)又称基因微矩阵(DNAmicroarry)具有微型化、高通量、并行处理易于自动化等优越性,它将大量的靶基因片段有序、高密度地排列在玻片、硅等载体上,用荧光检测后,通过计算机软件进行数据比较和分析,一次试验就可对上万种基因进行快速准确、的检测。
2、实时荧光定量PCR: 目前有效、灵敏的方法就是实时荧光定量PCR ( real time RT-PCR ) ,根据目标核酸基因来设计引物实现对靶标的检测,已广泛应用在样品的检测。real time RT-PCR是将荧光能量传递技术应用于PCR仪中,在PCR的反应体系中加入荧光基团,利用获取的荧光信号积累来实时监测整个PCR进程,终通过得到的标准曲线对未知得模板进行定量分析的方法。
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