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病毒增殖的观察:
病毒在细胞内增殖的指标:
1、细胞形态的改变;
2、红细胞吸附;
3、细胞培养液pH值改变;
病毒数量趿病毒感染性测定:
1、血凝试验;
2、中和试验;
3、空斑形成试验;
4、半数感染量(ID50)和组织培养半数感染量( TCID50 )。
消毒与检测方案
1.消毒依据
《公共场所感染的卫生防护指南》(机制发〔2020〕15号)
广东省疾病预防控制中心“关于印发普通家庭、公共交通服务单位及公共交通工具、农贸市场预防感染的卫生清洁消毒指引的通知”
《广东省餐饮服务业感染的预防控制指引》
四川省公共场所室内环境“感染的”预防指南等
2.消毒服务类型
(1)预防性消毒:定期对的处理区域进行一次消毒,使用容量喷雾机对环境及物体表面进行喷雾消毒。
(2)应急性消毒:在区域内发现源或生物污染物时,需及时对相关区域进行应急消毒。使用容量喷雾,对环境、空气及物体表面进行喷雾(洒)消毒。对重点部位的物体表面进行擦拭消毒。
3.消毒作业方法:详见广州市微生物研究所消毒作业方法
4.检测方案
参照《GB/T 18883-2002室内空气质量标准 附录D 室内空气中菌落总数的检验方法》对室内空气中的菌落总数进行测试,以确保消毒效果。
病毒的分离与培养:主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种法等,而对细胞、鸡胚不敏感,又没有合适动物模型的病毒,可采用基因克隆的方法。
1、细胞培养法:二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织,主要用于培养病毒制备疫苗等;原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞,原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和后立即进行培养;传代细胞来源于细胞或细胞株传代过程中变异的细胞。
2、鸡胚培养:鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法,此方法可用以进行多种病毒的分离、培养,勒的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
3、动物接种:常用的实验动物有、乳鼠、、家兔猴和鸡等;常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式。
病毒核酸分子检测:
1、基因芯片:基因芯片(gene chip)又称基因微矩阵(DNAmicroarry)具有微型化、高通量、并行处理易于自动化等优越性,它将大量的靶基因片段有序、高密度地排列在玻片、硅等载体上,用荧光检测后,通过计算机软件进行数据比较和分析,一次试验就可对上万种基因进行快速准确、的检测。
2、实时荧光定量PCR: 目前有效、灵敏的方法就是实时荧光定量PCR ( real time RT-PCR ) ,根据目标核酸基因来设计引物实现对靶标的检测,已广泛应用在样品的检测。real time RT-PCR是将荧光能量传递技术应用于PCR仪中,在PCR的反应体系中加入荧光基团,利用获取的荧光信号积累来实时监测整个PCR进程,终通过得到的标准曲线对未知得模板进行定量分析的方法。
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