病毒是无细胞结构的小,简单的微生物。但病毒的感染很普遍,在微生物引起的感染性疾病中大多数由病毒引起。病毒感染在感染性疾病中占有重要地位,尽快获得病毒的实验诊断,对控制病毒的传播,疾病的诊断和防治有较其重要意义,而且通过实验诊断还可以发现新病毒。目前的病毒检测技术主要有传统的病毒分离培养,中和实验,凝集试验,电镜技术等;*学的*荧光检测,酶*法,*层析法,放射*法等;分子生物学的聚合酶链反应,基于核酸序列的扩增技术,环介导等温扩增技术,Xtag RVP技术,生物芯片技术等。
空斑形成试验:是一种检查和准确测定病毒滴度的方法。
1、将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后,再覆盖-层融化的半固体营养琼脂,使病毒在单层细胞培养中有限扩散。
2、结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红)染色,则活细胞着色,受病毒感染而破坏的细胞不着色,形成肉眼可见的空斑/蚀斑(plaque)。
3、每个蚀斑是由一个感染毒颗粒形成的 ,称作空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)。
4、病毒悬液中的感染毒量的滴度可用PFU / 表示。
病毒增殖的观察:
病毒在细胞内增殖的指标:
1、细胞形态的改变;
2、红细胞吸附;
3、细胞培养液pH值改变;
病毒数量趿病毒感染性测定:
1、血凝试验;
2、中和试验;
3、空斑形成试验;
4、半数感染量(ID50)和组织培养半数感染量( TCID50 )。
消毒与检测方案
1.消毒依据
《公共场所感染的卫生防护指南》(机制发〔2020〕15号)
广东省疾病预防控制中心“关于印发普通家庭、公共交通服务单位及公共交通工具、农贸市场预防感染的卫生清洁消毒指引的通知”
《广东省餐饮服务业感染的预防控制指引》
四川省公共场所室内环境“感染的”预防指南等
2.消毒服务类型
(1)预防性消毒:定期对的处理区域进行一次消毒,使用容量喷雾机对环境及物体表面进行喷雾消毒。
(2)应急性消毒:在区域内发现源或生物污染物时,需及时对相关区域进行应急消毒。使用容量喷雾,对环境、空气及物体表面进行喷雾(洒)消毒。对重点部位的物体表面进行擦拭消毒。
3.消毒作业方法:详见广州市微生物研究所消毒作业方法
4.检测方案
参照《GB/T 18883-2002室内空气质量标准 附录D 室内空气中菌落总数的检验方法》对室内空气中的菌落总数进行测试,以确保消毒效果。
病毒检测形态学检查及诊断:
1、光学显微镜:直接观察到较大的病毒体(如痘病毒)、包涵体狂犬病毒感染一一嗜酸性包涵体。
2、扫描电子显微镜:用于观察病毒和表面结构和附属结构等。
3、透射电子显微镜:用于观察病毒的大小、形态与结构及细胞内的**微结构等。
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