病毒灭活效果检测 经验丰富

病毒检测技术反映病毒的核酸水平、感染的状态、性和评定治果,对病情的诊断、和用药上起着关键性的作用,可根据检查结果判断和选择患者适宜的抗病物种类,并制定适宜的方案;可根据病毒核酸量的动态变化对患者用药的剂量、时间及是否需要联合用药等提供重要的参考依据。病毒检测技术在评价和观察抗病物的、*增强药物的及定预后效果都有重要应用。
病毒核酸分子检测：
1、基因芯片：基因芯片(gene chip)又称基因微矩阵(DNAmicroarry)具有微型化、高通量、并行处理易于自动化等优越性,它将大量的靶基因片段有序、高密度地排列在玻片、硅等载体上，用荧光检测后，通过计算机软件进行数据比较和分析,一次试验就可对上万种基因进行快速准确、的检测。
2、实时荧光定量PCR： 目前有效、灵敏的方法就是实时荧光定量PCR ( real time RT-PCR ) ,根据目标核酸基因来设计引物实现对靶标的检测，已广泛应用在样品的检测。real time RT-PCR是将荧光能量传递技术应用于PCR仪中，在PCR的反应体系中加入荧光基团,利用获取的荧光信号积累来实时监测整个PCR进程,终通过得到的标准曲线对未知得模板进行定量分析的方法。

病毒增殖的观察：
病毒在细胞内增殖的指标：
1、细胞形态的改变；
2、红细胞吸附；
3、细胞培养液pH值改变；
病毒数量趿病毒感染性测定：
1、血凝试验；
2、中和试验；
3、空斑形成试验；
4、半数感染量(ID50)和组织培养半数感染量( TCID50 )。

病毒的分离与培养：主要有细胞培养法、鸡胚培养法、动物接种法等,而对细胞、鸡胚不敏感，又没有合适动物模型的病毒，可采用基因克隆的方法。
1、细胞培养法：二倍体细胞株来源于正常人胎儿组织,主要用于培养病毒制备疫苗等;原代细胞是指从机体取出后立即培养的细胞,原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和后立即进行培养;传代细胞来源于细胞或细胞株传代过程中变异的细胞。
2、鸡胚培养：鸡胚培养法是用来培养某些对鸡胚敏感的动物病毒的一种培养方法,此方法可用以进行多种病毒的分离、培养,勒的滴定,中和试验以及抗原和疫苗的制备等。
3、动物接种：常用的实验动物有、乳鼠、、家兔猴和鸡等;常用的接种途径包括皮下、皮内、腹腔、静脉、角膜、鼻腔及脑内接种等方式。

空斑形成试验：是一种检查和准确测定病毒滴度的方法。
1、将稀释的病毒悬液加入单层细胞培养瓶中。病毒吸附后,再覆盖-层融化的半固体营养琼脂,使病毒在单层细胞培养中有限扩散。
2、结果是每一个有感染性的病毒在单层细胞中可产生一个局限性的感染灶。用活性染料(如中性红)染色,则活细胞着色,受病毒感染而破坏的细胞不着色,形成肉眼可见的空斑/蚀斑(plaque)。
3、每个蚀斑是由一个感染毒颗粒形成的 ,称作空斑形成单位(plaque forming unit, PFU)。
4、病毒悬液中的感染毒量的滴度可用PFU / 表示。
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